Хемилюминесцентный иммунный анализ

По идеологии хемилюминесцентный иммунный анализ не отличается от радиоиммунного, с той только разницей, что вместо радиоактивно-меченных субстратов или антител используются субстраты и антитела,"меченные" соединением, которое вступает в реакции, сопровождающиеся хемилюминесценцией, в присутствии перекиси водорода и катализатора (обычно это фермент пероксидаза).

Хемилюминесцентной меткой (ХЛ

-меткой) чаще всего служат низкомолекулярные соединения, по химической структуре близкие люминолу и люцигенину, такие как изолюминол, сукцинилированный люминол, эфиры акридиния и другие. Присоединение хемилюминесцентной метки производится либо к антигену, т. е. низкомолекулярному соединению либо к антителу на этот антиген. В первом случае метод называется CIA (Chemiluminescent Immuno Assay), во втором - ICMA (ImmunoChemiluminoMetric Assay). По русски это соответствовало бы ХИА (Хемилюминесцентный Иммунный Анализ) и ИХМА (Иммуно-ХемилюминоМетрический Анализ).

Оба метода направлены на определение биологически-важных низкомолекулярных соединений (например, гормонов) в тех концентрациях (как правило, очень низких), в которых они встречаются в биологических объектах.

При использовании метода CIA

к раствору, содержащему интересующее нас анализируемое соединение (обозначим его как A) добавляют определенное количество того-же, но ХЛ

-меченного соединения (обозначим его как A*

) и антитела (анти-A

). Образуется смесь меченных и немеченных иммунных комплексов (A-анти-A

и A*-анти-A

, соответственно):

A + A* +

анти

-A

®

A-

анти

-A + A*-

анти

-A.

Очень важно, что пропорция между меченным и немеченым иммунными комплексами зависит от того, сколько меченного антигена мы добавили (A*

) и сколько немеченого было в исследуемой пробе (A

), а именно: чем больше было немеченого антигена, тем меньше доля меченных антител.

Теперь остается очистить смесь иммунных комплексов и определить количество A*-анти-Aпо хемилюминесценции. Интенсивность ХЛ

будет тем меньше, чем больше было немеченых антигена A

(т. е. анализируемого вещества) в исследуемой пробе. Чтобы анализ был количественным, предварительно строят калибровочную кривую, т. е. измеряют зависимость интенсивности ХЛ

в конечной пробе от концентрации стандартного раствора изучаемого вещества A

. Затем измеряют интенсивность ХЛ

в растворе с неизвестной концентрацией антигена (A

), повторяя те же процедуры, и по калибровочной кривой находят концентрацию A

.

При использовании метода ICMA берут избыток ХЛ

-меченного антитела (анти-A*

) и добавляют к нему раствор с изучаемым веществом (A

). Образуется ХЛ

-меченный иммунный комплекс:

A +

анти

-A*

®

A-

анти

-A*

Остается отделить иммунные комплексы от других участников реакции и измерить интенсивность ХЛ

. В данном случае она будет тем выше, чем больше было анализируемого вещества A